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1.结締组织染色 1.3.1.Weigert氏间苯二酚品红法
发布人:xiaridebing    点击率:3148次
1.3.1.Weigert氏间苯二酚品红法
[固   定]            
10%甲醛水溶液为宜,酒精和其他固定液均可。但Zenker氏固定 液固定组织染色缓慢,且与胶原纤维染色混淆,不宜使用。
[试   剂]
酸性过锰酸钾水溶液
1%草酸水溶液
95%酒精溶液
Weigert氏染液:  
盐基性品红                2g
间苯二酚                  4g
29%氯化铁水溶液        25ml
蒸馏水                 200ml
盐酸                     4ml
配制:将品红,间苯二酚与蒸馏水混合煮沸,再加29%氯化铁,用玻璃棒搅匀,继续煮沸2—3分钟,冷却后过滤,倾去滤液,将滤纸与沉淀物置于干燥箱内烤干。再以95%酒精200ml加热溶解之取出滤纸,再过滤,并以95%酒精补足总量至200ml,最后加盐酸4ml。4—6周染色效果最好。
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2..酸性过锰酸钾水溶液氧化5分钟,水洗。
3.1%草酸水溶液漂白,水洗。
4.95%酒精浸润。
5..入Wergert氏液内20—60分钟。
6.用95%酒精洗去多余的染料(显微镜下观察,如染色弥漫摸糊 不清,可用1%盐酸酒精分化),水洗,蒸馏水洗。                   
7.对比染色(VG,HE或1%中性红)。
8.常规脱水,透明,封固。
[结   果]
弹力纤维呈黑色;其余呈对比染色。
1.3.2.Hart氏间苯二酚品红改良法
[   ]
10%甲醛水溶液为宜,酒精和其他固定液均可。但Zenker氏固定液固定组织染色缓慢,且与胶原纤维染色混淆,不宜使用。
[   ]
酸性过锰酸钾水溶液
1%草酸水溶液
95%酒精溶液
Weigert氏染液:  
盐基性品红                2g
间苯二酚                  4g
29%氯化铁水溶液        25ml
蒸馏水                 200ml
盐酸                     4ml
配制:将品红,间苯二酚与蒸馏水混合煮沸,再加29%氯化铁,用玻璃棒搅匀,继续煮沸2—3分钟,冷却后过滤,倾去滤液,将滤纸与沉淀物置于干燥箱内烤干。再以95%酒精200ml加热溶解之取出滤纸,再过滤,并以95%酒精补足总量至200ml,最后加盐酸4ml。4—6周染色效果最好。
Weigert氏染液:
Weigert氏原液            10ml  
1%盐酸酒精(95%)溶液   90ml
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.酸性过锰酸钾水溶液氧化5分钟
3.自来水洗。
4.1%草酸水溶液漂白,
5.自来水洗。
6.95%酒精浸润。
7.入Wergert氏液内8~24小时。
8.用95%酒精洗去多余的染料(显微镜下观察,如染色弥漫摸糊不清,可用1%盐酸酒精分化)。
9.自来水洗,蒸馏水洗。                   
10.对比染色(VG,HE或1%中性红)。
11.常规脱水,透明,封固。
[    ]
弹力纤维呈黑色;其余呈对比染色。

 
1.3.3.Verhoeff氏铁苏木精法
[   ]
10%甲醛水溶液等。
[   ]
Verhoeff氏铁苏木精染液:
5%苏木素纯酒****   20ml
10%三氯化铁水溶液   8ml
Verhoeff氏碘溶液    8ml
将上述三液分别配制贮存,临用时按比例混合摇荡使用。此液不可久存。
Verhoeff氏碘溶液:
碘              2g
碘化钾          4g
蒸馏水        100ml
2%三氯化铁水溶液:
5%硫代硫酸钠水溶液:
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡蒸馏水洗。
2.用Verhoeff氏染液染色15-30分钟,至颜色呈深黑色。
3.自来水洗。
4.2%三氯化铁水溶液分化10-20秒钟,至弹力纤维清晰为止。
5.充分自来水洗。
6.用5%硫代硫酸钠溶液处理5分钟。
7.充分自来水洗,再用蒸馏水洗。
8.95%酒精急速分化。
9.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结   果]
弹力纤维呈黑色或蓝黑色,肌纤维、纤维素、神经胶质呈黄色,胶原纤维呈红色,胞核呈蓝黑色。
 
 
 
1.3.4.Unna氏地衣红染色法
[    ]
10%甲醛水溶液等。
[    ]
Unna氏地衣红染液:      
地衣红            1g
70%酒精       100ml
浓盐酸           1ml
(配好置冰箱保存,一天后即可用)
70%酒精溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至70%酒精。
2.置Unna氏染液过滤液于37℃温箱内15—30分钟或室温下过夜。
3.70%酒精充分洗涤,流水冲洗。
4.以酒精或酸性酒精分化至弹力纤维清晰为止。
5.纯酒精脱水,透明,封固。
[    ]
弹力纤维呈深棕色;结缔组织呈浅棕色;细胞核呈蓝色。

 
1.3.5.Pinkn氏酸性地衣红-姬姆萨氏染色法
[   ]
10%甲醛水溶液;Helly氏或Zenker氏固定液。
[   ]
地衣红染液:  
地衣红              1g
70%酒精溶液      100ml
浓盐酸            0.6ml
姬姆萨氏溶液: 
姬姆萨氏原液        5dp
蒸馏水            100ml
酒精伊红溶液: 
伊红                 5g
95%酒精溶液      100ml
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
 (含汞固定液者常规脱汞处理)
2.70%酒精漂洗。
3.地伊红染液30—60秒钟,蒸馏水洗。
4.95%酒精分化,洗去多余染液。
5.纯酒精中脱色分化5—30分钟(镜下见浅棕或紫道黑色)。
6.1%盐酸酒精脱基底近无色(镜下控制)。
7.自来水洗5—10分钟。
8.95%酒精(在其中加数滴“酒精伊红”分化至多量的蓝色从结缔组织中脱掉,镜下控制)。
9.纯酒精脱水二次,透明,封固。
[   ]
弹力纤维呈深棕到黑色;细胞核呈深蓝色;胶原纤维呈粉红到浅蓝色;黑色素呈绿色或棕色;嗜伊红颗粒呈亮红色;肥大细胞颗粒呈蓝或紫色。

 
1.3.6.Gomori氏醛复红法
[   ]
各种固定液均可,但以生理盐水-甲醛溶液对其染色最佳。
[   ]
Lugol氏碘液
5%硫代硫酸钠水溶液
醛复红染液:   
盐基性品红              1g
70%酒精溶液            200ml
浓盐酸                  2ml
三聚乙醛(副醛)        2ml
配制 :将品红溶于酒精,再加盐酸及副醛,充分摇动,置室温24—48小时,染液呈紫色即可使用。成熟可存贮冰箱2—3个月。
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
 2.Lugol氏碘液20—30分钟,水洗。
 3.5%硫代硫酸钠水溶液5分钟,流水冲洗。
 4.75%~95%酒精溶液中漂洗。
 5.醛品红染液内5分钟*。
 6.95%酒精溶液洗涤,水洗。
 7.苏木精(桔黄G)作对比染色。
 8.常规脱水,透明,封固。
[   ]
弹力纤维呈生紫色;*醛品红不同染色时间亦显示其他物质:胰岛的β细胞(15-30分钟);垂体的β细胞(30-120分钟);肥大细胞颗粒(5-10分钟)。

 
1.3.7.改良Gomori氏醛复红法
[    ]
各种固定液均可,但以生理盐水-甲醛溶液对其染色最佳。
[    ]
Lugol氏碘液;
5%硫代硫酸钠水溶液
醛复红染液:   
盐基性品红              1g
70%酒精溶液            200ml
浓盐酸                  2ml
三聚乙醛(副醛)        2ml
配制 :将品红溶于酒精,再加盐酸及副醛,充分摇动,置室温24—48小时,染液呈紫色即可使用。成熟可存贮冰箱2—3个月。
70%酒精溶液
天青石蓝液:
天青蓝B            0.5g
硫酸铁铵             5g
甘油               14ml
蒸馏水             100ml
配制:硫酸铁铵溶于蒸馏水中,放置12~24小时后加入天青石蓝,稍加温煮沸,冷却后过滤,再加甘油。
Harri氏铁苏木****
固绿-桔黄G液:
固绿FCF             0.4g
桔黄G                0.8g
磷钼酸                 1g
冰醋酸                1ml
蒸馏水               100ml
配制:先配好1%冰醋酸溶液然后分别溶解磷钼酸,固绿及桔黄。
0.2%冰醋酸溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液20—30分钟,水洗。
3.5%硫代硫酸钠水溶液5分钟,流水冲洗。
4.70%酒精溶液中漂洗。
5.醛品红染液内15~30分钟。
6.70%酒精溶液分色,蒸馏水洗
7.天青石蓝液染5分钟,蒸馏水洗。
8.Harri氏铁苏木****内染5—10分钟。
9.自来水充分冲洗,蒸馏水洗。 
10.固绿-桔黄G液复染45秒钟~1分钟。
11.0.2%冰醋酸溶液洗。
12.常规脱水,透明,封固。
[    ]
弹力纤维呈和粘多糖呈紫红色-蓝青色;胰岛B细胞呈紫红色; 胰岛A细胞呈黄色;胰岛D细胞呈绿色;细胞核呈蓝黑色;胶原纤维呈绿色。
[    ]
用于显示真皮弹力纤维增生和变性等多种皮肤疾病;心血管疾病的心内膜中弹力纤维增生及血管中弹力纤维增生;肿瘤中弹力纤维增生等。