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1.结締组织染色 1. 1.胶原纤维染色法
发布人:xiaridebing    点击率:3659次
1. 1.胶原纤维染色法
1.1.1.Van Gieson氏染色法
[   ]
10%甲醛,Zenker氏液,酒精等。
[   ]
Weigert氏铁苏木****
1%盐酸酒精(70%)溶液
Van Gieson氏染液
1%酸性品红液            10ml
苦味酸饱和液(约1.22%) 90ml
(分瓶盛放,临用前按比例混合)
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Weigert氏铁苏木****内染5—10分钟。
3.流水稍冲洗。
4.1%盐酸酒精溶液迅速分化,自来水充分冲洗。。        
5.Van Gieson氏液内30—60秒钟。
6.蒸馏水速洗,用滤纸吸干(或从染色液内将切片取出,直接用95%洒精分化数秒)。
7.常规脱水,透明,封固。
[   ]
 
胶原纤维呈红至粉红色;肌肉和神经胶质呈黄色;细胞核呈蓝至蓝黑色。
 
1.1.2.改良Van Gieson氏染色法
[   ]
10%甲醛,Zenker氏液,酒精等。
[   ]
天青石蓝液:
天青蓝B            0.5g
硫酸铁铵             5g
甘油               14ml
蒸馏水            100ml
配制:硫酸铁铵溶于蒸馏水中,放置12~24小时后加入天青石蓝,稍加温煮沸,冷却后过滤,再加甘油。
          Harri氏铁苏木****
Van Gieson氏染液:
1%酸性品红液          20ml
苦味酸饱和液(约1.22%)80ml
蒸馏水                100ml
(分瓶盛放,临用前按比例混合加等量之蒸馏水煮沸,冷却后使用)
苦味酸95%酒精饱和液(89%
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.天青石蓝液染5分钟,蒸馏水洗。
3.Harri氏铁苏木****内染5—10分钟。
4.自来水充分冲洗,蒸馏水洗。
5.Van Gieson氏液内3—5分钟。
6.苦味酸-酒精饱和液分化数秒钟。
7.无水酒精迅速脱水,透明,封固。
[   ]
           胶原纤维呈红至粉红色;肌肉和神经胶质呈黄色;细胞核呈蓝至蓝黑色。
[临床应用]
用于区别胶原纤维,神经纤维和平滑肌等。
[注意事项]
             Van Gieson氏染液为苦味酸水溶液配制,对碱性染料具有很强的脱色能力,常用的明矾苏木精染核易被脱色,所以选用铁苏木精染核。红色可被水洗掉,应选用蒸馏水;苦味酸的黄色可被酒精脱掉,以酒精脱水时应迅速。

 
1.1.3.Mallory氏三色染色法
[   ]
Zenker氏液及Bouin氏液固定最好。甲醛固定的组织必须经过二次固定,以重铬酸钾—醋酸液处理15—60分钟。
[   ]
Lugol氏碘液
Mallory氏苯胺蓝液
苯胺蓝               0.5g
橘黄G                2.0g
1%磷钨酸水溶液      100ml
配制:苯胺蓝以1%磷钨酸液50ml水浴加热溶解;橘黄G以1%磷钨酸液50ml加热溶解, 冷却后分别过滤后混合.
0.5%酸性复红水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液脱汞盐结晶,充分水洗。
3.明矾苏木精常规染色,分化,水洗。
4.0.5%酸性复红水溶液染1—5分钟。
5.自来水洗30秒钟或较长,直至纤维将近无色为止,蒸馏水洗。
6.Mallory氏苯胺蓝液染约20分钟(勿水洗)。
7.直接以95%酒精分化(镜下控制)。
8.无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
[   ]
             胶原纤维,网状纤维,盐基性颗粒呈深蓝色;软骨,粘液,淀粉样物质呈淡蓝色;纤维素,神经胶质原纤维酸性颗粒呈红色;红细胞,髓鞘呈橘黄至橙红色;细胞核呈紫蓝色。

 
1.1.4.Mallory氏磷钼酸苏木精染色法
[   ]
Zenker氏液及Bouin氏液固定最好。甲醛固定的组织必须经过二次固定,以重铬酸钾—醋酸液处理15—60分钟。
[   ]
磷钼酸苏木精溶液
95%酒精溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.磷钼酸苏木精溶液染12~24小时,或54C温箱内染2~3小时。
3.95%酒精溶液分色。
4.无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
[   ]
结缔组织呈深蓝色。

 
1.1.5.Mallory氏磷钨酸苏木精染色法
[   ]
Zenker氏液及Bouin氏液固定最好。甲醛固定的组织必须经过二次固定,以重铬酸钾—醋酸液处理15—60分钟。
[   ]
Lugol氏碘液
5%硫代硫酸钠水溶液
Mallory氏磷钨酸苏木****
95%酒精溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液媒染2~3小时。
3.蒸馏水洗。
4.5%硫代硫酸钠水溶液脱碘。
5.Mallory氏磷钨酸苏木****染2~3小时 。
6.95%酒精溶液分色。
7.无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
[   ]
结缔组织呈深蓝色。

 
1.1.6. Masson氏三色染色法
[   ]
参照Mallory氏苯胺蓝三色法。
[   ]
酸性复红液:    
酸性复红           0.3g
丽春红             0.7g
冰醋酸             1.0ml
蒸馏水             100ml
苯胺蓝液:       
苯胺蓝             2.5g
冰醋酸             2.0ml
蒸馏水             100ml
2%亮绿-醋酸(2%)溶液
Weigert氏铁苏木****
1%盐酸酒****
1%磷钼酸水溶液
1%冰醋酸水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液脱汞盐结晶,充分水洗。
3.Weigert氏铁苏木****染20—30分钟。
4.1%盐酸酒精分化,水洗至蓝色。
5.酸性复红液染5分钟,迅速水洗。
6.1%磷钼酸水溶液媒染5分钟。
7.直接入苯胺蓝液内染5分钟。
8.%冰醋酸水溶液分化1—2分钟。
9.常规脱水,透明,封固。
[   ]
胶原纤维,软骨粘液,盐基性颗粒呈蓝色(如用亮绿则呈绿色);细胞浆,肌肉,嗜酸 性颗粒呈红色;细胞核呈蓝黑色。

 
1.1.7. Masson氏染色法
[   ]
Boiun氏、Zenker氏、Helly氏或Carnoy氏液及其他固定液。石蜡切片5微米。
[   ]
5%铁明矾水溶液
Regaud氏苏木****
2.5%铁明矾水溶液
或苦味酸-酒****:
95%酒精苦味酸饱和液    20ml
95%酒精溶液            10ml
1%酸性复红-醋酸(1%)水溶液
1%磷钼酸水溶液
2.5%醋酸-苯胺蓝饱和水溶液
1%醋酸水溶液
0.1%醋酸-无水酒精溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.5%铁明矾水溶液24小时,或50℃浸30分钟。
3.蒸馏水洗。
4.5%铁明矾水溶液分化至细胞核清晰。
5.自来水洗1分钟。
6.1%酸性复红-醋酸水溶液染5分钟,蒸馏水洗。
7.1%磷钼酸水溶液脱色,至结缔组织褪色,而细胞质呈红色为度。
8.2.5%醋酸-苯胺蓝饱和水溶液染2~5分钟。
9.蒸馏水洗。
10.1%醋酸水溶液脱去多余的苯胺蓝及磷钼酸,1~30分钟。
11.0.1%醋酸-无水酒精溶液迅速洗。
12.无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
[   ]
细胞核呈黑色,胶原纤维呈深蓝色,嗜银颗粒呈黑色或红色,神经胶原纤维呈红色。

 
1.1.8..Heidenhain偶淡胭脂染色法
[   ]
Zenker氏液,Bouin氏液; 或10%甲醛液。
[   ]
偶淡胭脂液: 
偶淡胭脂B        0.2—1g
(或G)          0.1g
冰醋酸             1.0ml
蒸馏水             100ml
配制:偶淡胭脂B与蒸馏水混合煮沸,稍冷后以粗号滤纸于55—60℃温箱内过滤
苯胺蓝液:    
苯胺蓝              0.5g
桔黄G              2.0g
冰醋酸              3.0ml
蒸馏水              100ml
配制:以上试剂混合煮沸后,冷却后过滤;临用时以1:3蒸馏水稀释。
0.1%苯胺油酒精(95%)分化液
1%醋酸酒精(95%)液
5%磷钨酸水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
(非Zenker氏液固定之组织切片以重铬酸钾—醋酸液处理15分钟)
2.Lugol氏碘液脱汞盐结晶,充分水洗。
3.浸入偶淡胭脂液于55℃温箱中染30分钟,蒸馏水洗。
4.入0.1%苯胺油酒****分化约15分钟。
5.以1%醋酸酒****洗涤约1—2分钟(镜下控制:仅细胞核,红细胞呈红色,其他为淡红色)。
6.入5%磷钨酸水溶液1小时;迅速水洗。
7.入稀释的苯胺蓝液染1小时,迅速水洗。
8.95%酒精,无水酒精脱水,透明,封固。
[   ]
             细胞核,红白细胞呈红色;胶原纤维,嗜碱性颗粒呈深蓝色;粘液呈蓝色;肌纤维,嗜酸性颗粒呈桔红色;神经胶质呈淡红色。
[注意事项]
福尔马林固定的组织此法染色的效果差,切片需在重铬酸钾—醋酸液固定12—18小时。

 
1.1.9.Pollak氏三色染色法
[   ]
参照Mallory氏法
[   ]
Pollak氏染液:   
 酸性品红          0.5g
Ponceau2R
(或丽春红)       1.0g
淡绿              0.45g
橘黄G            0.75g
磷钨酸            1.5g
冰醋酸            3.0ml
50%酒精          300ml
配制:先配制醋酸—酒****,分别溶解酸性品红与Ponceau2G,再与淡绿,橘黄G及磷钨酸混合过滤。
Weigert氏铁苏木精溶液
1%盐酸酒精
2%醋酸水溶液
70%酒精溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液脱汞盐结晶,充分水洗。
3.Weigert氏铁苏木****染15—20分钟。
4.水洗,盐酸酒精分化,充分水洗。
5.Ponceau氏液染3—7分钟。
6.0.2%冰醋酸液分化20秒(镜下控制)。
7.迅速以70%酒精洗1—2次。
8.常规脱水,透明,封固。
[    ]
胶原纤维,粘液呈蓝绿色;细胞核呈蓝黑色;心肌瘢痕,肌肉,弹力纤维呈红色;纤维素,钙呈紫蓝色;玻璃样物质呈淡蓝色。
[注意事项]
 凡是化合的酸性染色剂,同偶氮染色剂在与磷钼酸和磷钨酸一起时,均可获得满意的结果。磷钼酸使绿色和蓝色鲜艳,磷钨酸则增加红色。染色时间短则红色突出,时间长则绿色和蓝色较深;用自来水洗时红色淡薄,用酸性水洗,可使颜色不改变并使其加深和清晰。

 
1.1.10.改良Gomori氏染色法
[    ]
10%甲醛固定液。
[    ]
天青石蓝液: 
天青蓝B            0.5g
硫酸铁铵             5g
甘油               14ml
蒸馏水            100ml
配制:硫酸铁铵溶于蒸馏水中,放置12~24小时后加入天青石蓝,稍加温煮沸,冷却后过滤,再加甘油。
Harri氏苏木精染液
Gomori氏染液:
变色酸2R             0.8g
固绿FCF             0.4g
磷钨酸                 1g
冰醋酸                1ml
蒸馏水              100ml
配制:先配好1%冰醋酸溶液然后分别溶解磷钨酸,变色酸及固绿。
0.2%冰醋酸溶液
固绿-桔黄G液:
固绿FCF             0.4g
桔黄G                0.8g
磷钼酸                 1g
冰醋酸                1ml
蒸馏水              100ml
配制:先配好1%冰醋酸溶液然后分别溶解磷钼酸,固绿及桔黄。
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2.天青石蓝液染5~10分钟,水洗。
3.Harri氏苏木精染5~10分钟。
4.自来水洗至切片反兰,蒸馏水洗。
5.Gomori氏液染5~10分钟。
6.0.2%冰醋酸水溶液分化数秒钟(镜下控制)。
7.直接用固绿-桔黄G液染1~2分钟。
8.0.2%冰醋酸溶液快速冲洗。
9.95%酒精,无水酒精快速脱水。
10.二甲苯透明,树胶封固。
[    ]
胶原纤维呈绿色;肌纤维,胞浆和红细胞呈橘红色;细胞核呈蓝褐色。

 
1.1.11.显示胶原纤维染色的新方法
[    ]
10%中性甲醛固定液。
[    ]
70%酒精溶液
维多利亚蓝染液:
维多利亚蓝              0.5g
70%酒精溶液           100ml
丽春红-苦味酸液:
0.5%丽春红水溶液    10~15ml
饱和苦味酸溶液       85~90ml
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.70%酒精溶液稍洗。
3.维多利亚蓝液染15分钟,蒸馏水洗。
4.丽春红-苦味酸液滴染5分钟。
5.直接用无水酒精洗及脱水。
6.二甲苯透明,树胶封固。
[    ]
胶原纤维呈红色,细胞核及红细胞呈绿色,肌肉呈黄色。

 
1.1.12.天狼星红-苦味酸染色法
[    ]
10%中性甲醛固定液。
[    ]
天青石兰液: 
天青石兰B                 25g
铁明矾                    1.25g
甘油                      30ml
盐酸                      0.5ml
蒸馏水                   250 ml
配制:天青石兰,铁明矾以蒸馏水溶解煮沸,冷却过滤后加甘油,再加盐酸。
天狼星红-苦味酸液:
0.5%天狼星红溶液      10ml
饱和苦味酸水溶液      90ml
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.天青石兰液染5~10分钟。
3.蒸馏水洗三次。
4.天狼星红-苦味酸液染5~30分钟。
5.无水酒精分化及脱水。
6.二甲苯透明,树胶封固。
[    ]
胶原纤维呈红色,细胞核呈绿色,其他呈黄色。
偏光显微镜下:I型胶原纤维,紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维;II型胶原纤维,显示很弱的双折光性,呈多种色彩的疏松网状分布;III型胶原纤维,显示很弱的双折光性,呈绿色的细纤维;IV型胶原纤维,显示很弱的双折光性基膜,呈淡黄色。

 
1.1.13.Lillie猩红-苦味酸-苯胺蓝法
[   ]
10%甲醛固定液,Zenker氏液或Orth液。
[   ]
Weigert氏铁苏木****
0.2%猩红-醋酸(1%)水溶液
0.1%苯胺蓝苦味酸饱和水溶液
1%冰醋酸水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Weigert氏苏木精染5分钟。
3.自来水洗。
4.0.2%猩红-醋酸(1%)水溶液染4分钟。
5.蒸馏水洗。
6.0.1%苯胺蓝苦味酸饱和水溶液染4分钟。
7.1%冰醋酸水溶液。
8.常规脱水、透明,封固。
[   ]
结缔组织纤维(含网状纤维)呈深蓝色,肌肉组织及胞浆呈粉红色,核呈灰色至黑色,粘液呈蓝色。